发布日期[2022/10/20]
生物系统对pH的变化非常敏感
,PH的变化可能改变或甚至终止正在进行的实验
。 因此
,配制有效的保持实验pH稳定的对实验的成功至关重要
。
建立一个良好的缓冲体系
,主要要考虑以下标准
:
-
pKa
大多数生物反应发生在PH 6-8之间
,因此理想的缓冲液需要具有在该范围内的pKa值
,以提供最大缓冲能力
。 大多数缓冲液在20℃
,1个pKa单位内的pH下能最好地工作
。 如果你认为你的实验会降低反应的pH值
,那么选择一个pKa值略低于工作pH值的缓冲液
。 同样,如果您希望实验提高您的工作pH
,请选择pKa略高的缓冲液
。
2. 溶解性
缓冲液应非常易溶于水
,在非极性溶剂(脂肪
,油和有机溶剂)中极少溶解
。 这防止缓冲液积累在细胞膜
,囊泡和其他非极性区室中
。
3. 膜不渗透性
缓冲液不应该容易地通过细胞膜
,这可以减少缓冲液在亚细胞结构中不成比例的累积
。
4. 最小盐效应
盐虽可以调节化合物的缓冲能力,但高离子缓冲液可引起生物系统的问题或其它反应
。 如
:在钙依赖的反应中应该避免柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液(Tris也能螯合钙)
。
5. 对解离的影响
缓冲液浓度
、温度和离子强度应当对缓冲液的解离具有最小的影响
。
6. 离子强度
确保你的缓冲液对你的实验环境的离子浓度没有太大的影响
,正常生理离子强度为
:100-200mM的KCl或NaCl
。 一些缓冲液
,如磷酸盐
,可以显著影响溶液中离子的浓度
。
7. 阳离子相互作用
如果缓冲液和阳离子配体形成复合物
,该复合物应是可溶的
。 理想情况是
,至少一些缓冲化合物不会形成复合物
。
8. 稳定性
缓冲液应当是化学稳定的
,抵抗酶促和非酶促降解
9. 生化惰性
缓冲液不应影响或参与任何生化反应
。
10. 光吸收
缓冲剂不应吸收波长在230nm和700nm之间的可见光或紫外光
。 这防止了对分光光度测定的干扰
。
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