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      Tips :如何配制合适的buffer?
      发布日期[2022/10/20]

      生物系统对pH的变化非常敏感 ,PH的变化可能改变或甚至终止正在进行的实验 。 因此 ,配制有效的保持实验pH稳定的对实验的成功至关重要 。 

      建立一个良好的缓冲体系 ,主要要考虑以下标准 : 

      1. pKa

      大多数生物反应发生在PH 6-8之间 ,因此理想的缓冲液需要具有在该范围内的pKa值 ,以提供最大缓冲能力 。 大多数缓冲液在20℃ ,1个pKa单位内的pH下能最好地工作 。 如果你认为你的实验会降低反应的pH值 ,那么选择一个pKa值略低于工作pH值的缓冲液 。 同样,如果您希望实验提高您的工作pH ,请选择pKa略高的缓冲液 。

       

      2. 溶解性

      缓冲液应非常易溶于水 ,在非极性溶剂(脂肪 ,油和有机溶剂)中极少溶解 。 这防止缓冲液积累在细胞膜 ,囊泡和其他非极性区室中 。

       

      3. 膜不渗透性

      缓冲液不应该容易地通过细胞膜  ,这可以减少缓冲液在亚细胞结构中不成比例的累积 。

       

      4. 最小盐效应

      盐虽可以调节化合物的缓冲能力,但高离子缓冲液可引起生物系统的问题或其它反应 。 如 :在钙依赖的反应中应该避免柠檬酸盐和磷酸盐缓冲液(Tris也能螯合钙) 。

       

      5. 对解离的影响

      缓冲液浓度 、温度和离子强度应当对缓冲液的解离具有最小的影响 。

       

      6. 离子强度

      确保你的缓冲液对你的实验环境的离子浓度没有太大的影响 ,正常生理离子强度为 :100-200mM的KCl或NaCl 。 一些缓冲液 ,如磷酸盐 ,可以显著影响溶液中离子的浓度 。

       

      7. 阳离子相互作用

      如果缓冲液和阳离子配体形成复合物 ,该复合物应是可溶的 。 理想情况是 ,至少一些缓冲化合物不会形成复合物 。

       

      8. 稳定性

      缓冲液应当是化学稳定的 ,抵抗酶促和非酶促降解

       

      9. 生化惰性

      缓冲液不应影响或参与任何生化反应 。

       

      10. 光吸收

      缓冲剂不应吸收波长在230nm和700nm之间的可见光或紫外光 。 这防止了对分光光度测定的干扰 。

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