如何选择缓冲剂 ？

选择缓冲系统时 ，缓冲液的pKa变化超过pH单元 ，缓冲能力明显下降 ，缓冲系统不得影响蛋白质的活性或DNA的稳定性 ，避免其他离子的干扰 。另外 ，考虑到温度的影响 ，温度不仅影响缓冲液 ，还影响细胞 ，很多动物细胞在37℃的生理状况下pH为7.07.5 ，温度下降到0℃时达到8.0 。

一 、磷酸盐缓冲液的优缺点:

磷酸盐缓冲液是广泛使用的缓冲剂 ，由于有二次解离 ，缓冲的pH值范围广 ，可配置各种pH值的酸性 、碱性 、中性缓冲液 。

优点:

容易配合各种浓度 。

适用的pH范围很广 。

pH受温度的影响很小 。

稀释后pH的变化很小 。

缺点:与常见的钙离子 、镁离子和重金属离子合成沉淀 。

二 、Tris缓冲液的优缺点:

Tris缓冲液是生物化学研究中广泛使用的缓冲剂 ，其本身是弱碱 ，常用的有效pH在中性范围内 。

优点:

碱性强 ，只有这种缓冲液可以配置从酸到碱的范围pH缓冲液

对生物化学过程的干扰很小 ，不会沉淀钙 、镁离子和重金属离子

因为容易吸收空气中的CO2 ，所以制作的缓冲液必须密封

该缓冲液对某个pH电极产生一定的干扰作用 ，因此使用与Tris溶液兼容的电极 。

缺点:

pH受浓度影响较大 ，稀释10倍 ，pH变化大于0.1 。

温度效应大 ，例如4℃时pH=8.4 ，37℃时pH=7.4 。

三 、HEPES缓冲液的优缺点:

HEPES是非离子两性缓冲液 ，在pH7.27.4范围内具有良好的缓冲能力 ，常用于生化诊断试剂盒 、DNA/RNA提取试剂盒和PCR诊断试剂盒 。

优点:开放式培养和细胞观察可以维持一定的pH值 ，对细胞没有毒性作用 。

缺点:高浓度时可能对细胞有毒 ，与其他缓冲剂相比价格稍高 。

四 、PIPES缓冲液的优缺点:

PIPES是哌喹缓冲液家族的一员 ，与HEPES属于同一家族 。是两性离子Goods缓冲液 ，在6.1到7.5的pH范围内有效 。由于pH范围与HEPES略有差异 ，因此PIPES的浓度HEPES浓度的一半 。

优点:

该缓冲剂不与金属结合 ，可用于含有金属离子的溶液

可用于色谱分析，电子显微镜固定植物细胞 ，替代草甘膦缓冲液 。

缺点:

溶液的pH值上升到6.5以上时 ，PIPES的游离酸容易溶解 ，但PIPES的钠盐容易溶解

使用游离酸形式的缓冲液时 ，请使用氢氧化钠将其转化为钠盐 ，以提高在较低的pH下的溶解度

像HEPES一样 ，PIPES不适用于与氧化还原反应相关的实验 。因为它会形成自由基 。